2D-DIGE实验外包服务

2D-DIGE

      DIGE — 双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE)，是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白组学定技术，其分离蛋白混合的原理与双向电泳是一致的，主要利用蛋白的等电点和分子的差异来分离蛋白混合物，同时应用荧光染料的灵敏度及内标的使用等技术，使其在定蛋白组学的研究中效果明显于传统双向电泳。
      DIGE使用的荧光染料有Cy2, Cy3和Cy5，它们能与蛋白的赖氨酸侧链氨基反应而使蛋白被标记，被标记蛋白的等电点和分子几乎不受影响，等混合标记好的蛋白后进行双向电泳，不同凝胶之间可以通过cy2内标匹配，消除凝胶之间的差异，蛋白表达的变化则通过cy3和cy5不同荧光的强度来体现。
 
二、与常规双向电泳后，银染或考染胶相比，DIGE具有以下势： 
     1、灵敏度高，较低可检测到125pg的蛋白；
     2、高效性，同一块凝胶上可以电泳两个样品，减轻了工作；
     3、线性范围更广,动态范围高达10-5；
     4、定精确, 采用内标消除了凝胶与凝胶之间的实验误差，显著提高了实验的精确度和可重复性；
     5、统计学分析，Image7.0（DIGE）软件可以得到统计学可信的结果，降低了操作者之间的偏差。

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