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定量蛋白组学实验外包

定量蛋白组学实验外包

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SILAC

背景简介:

    SILAC( Stable Isotope  Labeling with   Amino acids in  Cell culture)技术是依据细胞生长对必需氨基酸的依赖原理,利用稳定同位素标记( 13C,15N,2H)的必需氨基酸对细胞蛋白组进行代谢标记的方法;13C,15N,2H是稳定同位素,没有放射性,因此可以在常规条件下进行试验。

    Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。将(13C,15N,2H)等稳定同位素标记的R、K、L加入细胞培养基中,在细胞进
行蛋白合成时,这些稳定同位素标记的氨基酸自然被“掺入”到蛋白中。通过>6代的细胞增殖,整个细胞的蛋白组会被

稳定同位素氨基酸”标记”;

     SILAC“标记”了蛋白与“未标记”的蛋白(普通培养基培养)存在一定数目的差异,该差异在后续LC-MS的一

级谱( MSl)中呈现一对同位素谱峰,通过谱峰的信号强度能精确实现对2组样品中每一个蛋白表达水平的相对定,
终能确定蛋白表达水平差异(差异蛋白组学分析)和区分特异性和非特异性相互作用(蛋白相互作用分析);同时通
过二级谱( MS/MS,MS2)实现对样品中蛋白的鉴定。
     SILAC技术结合LC-MS能同时实现对2组样品中蛋白的定性和定分析。实验技术“高、大、上“,定精确,通过定墨信息能直接反映出样品之间的蛋白表达水平差异,便于快速找到感兴趣的目标分子。同时,利用SILAC技术,能明显提高文章的

档次。

SILAC氨基酸对照表:


SILAC实验设计:



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