SILAC
背景简介:
SILAC( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技术是依据细胞生长对必需氨基酸的依赖原理,利用稳定同位素标记( 13C,15N,2H)的必需氨基酸对细胞蛋白组进行代谢标记的方法;13C,15N,2H是稳定同位素,没有放射性,因此可以在常规条件下进行试验。
Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。将(13C,15N,2H)等稳定同位素标记的R、K、L加入细胞培养基中,在细胞进稳定同位素氨基酸”标记”;
SILAC“标记”了蛋白与“未标记”的蛋白(普通培养基培养)存在一定数目的差异,该差异在后续LC-MS的一
级谱( MSl)中呈现一对同位素谱峰,通过谱峰的信号强度能精确实现对2组样品中每一个蛋白表达水平的相对定,档次。
SILAC氨基酸对照表:
SILAC实验设计:
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